ЦЕНТРАЛЬНА ЛАБОРАТОРІЯ м. Тернопіль / бул. Дмитра Вишневецького, буд. 1 пр. 53 / (0352) 40-11-17 / (095) 830-29-84 / (098) 055-43-68
Європейський Лікувально-діагностичний центр ТзОВ "Румед-Т"! 46000, м. Тернопіль, вул. Шашкевича, буд.№3 (двір "Старої піццерії") (0352)52-16-56, (066)2370315, (097)0604922

ПРАВИЛА забору, транспортування та зберігання клінічного матеріалу  для  ПЛР-діагностики (біологічна рідина, шматочки тканин тощо)

1. Підготовка  до здачі клінічного матеріалу для ПЛР-діагностики  включає кілька основних правил:

• протягом доби утриматись від застосування місцевих препаратів і процедур;
Бажано:
• протягом 3 діб утримуватися від незахищеного статевого життя, прийому алкоголю;
• обстежитися до або не раніше 14 діб після закінчення курсу антибактеріальної, анти- грибкової терапії, якщо інше не рекомендовано Вашим лікарем.

2. Для діагностики інфекцій використовують різний клінічний матеріал –  зішкріб або мазок зі слизових оболонок, сечу, секрет передміхурової залози, сперму тощо. Вибір матеріалу залежить від діагностичної мети і статі. Для ПЛР-досліджень використовують  біологічний матеріал:

 

•  Сеча:
         Для чоловіків.  При сечовипусканні необхідно повністю відтягнувши шкірну складку, звільнити зовнішній отвір сечовипускального каналу. Для аналізу відбирають першу порцію  ранішньої сечі у кількості 15–25 мл в спеціальну суху стерильну ємкість на 50–100 мл.
         Для жінок.  З метою запобігання потрапляння в сечу виділень з зовнішніх статевих органів забір першої порції  ранішньої сечі (15–25 мл) в спеціальну суху стерильну ємкість на 50-100 мл проводиться після їх ретельного туалету. Щоб не відбулося контамінації сечі виділеннями з піхви бажано перед збором матеріалу в піхву закладати тампон. Також не слід проводити забір сечі під час менструації.
         Умови зберігання та перевезення: нативні та заздалегідь оброблені зразки при t 2–8 °С — протягом 1 доби; при t (- 20) °С — протягом  1 тиж.; при t (-70)°С — довготривало. Допускається лише одноразове заморожування матеріалу.
•  Спинномозкова рідина:
Спинномозкову рідину у кількості не менше 1 мл збирають, використовуючи одноразову голку, в одноразові пластикові пробірки об`ємом 1,5 -  2,0 мл.
         Умови зберігання та перевезення: нативні та заздалегідь оброблені зразки при t 2–8 °С — протягом 1 доби; при t (- 20) °С — протягом  1 тиж.; при t (-70)°С — довготривало. Допускається лише одноразове заморожування матеріалу.
         Взірці не потребують попередньої обробки. Проте, для концентрації клітин, що містять віруси, і бактерій при деяких інфекційних захворюваннях (ЛЗН (Лихоманка Західного Нілу), вірусно-коковий енцефаліт, лептоспіроз, токсоплазмоз тощо) центрифугують 1 мл ліквору при 10000–11000 об./хв та досліджують осад і 100 мкл надосадової рідини.

•  Слізна рідина:
Слізну рідину у кількості не менше 0,5 мл збирають, використовуючи одноразові пластикові піпетки, в одноразові стерильні пластикові пробірки об'ємом 1,5 або 2,0 мл. Для посилення сльозовиділення проводять провокацію сльозоточивою речовиною (зазвичай використовують нашатирний спирт).
         Умови зберігання та перевезення: нативні та заздалегідь оброблені зразки при t 2–8 °С — протягом 1 доби; при t (- 20) °С — протягом  1 тиж.; при t (-70)°С — довготривало. Допускається лише одноразове заморожування матеріалу.
         Взірці не потребують попередньої обробки.

•  Сперма:
Отримання сперми здійснюють в спеціальну суху стерильну ємкість на 50-100 мл.
         Умови зберігання та перевезення: нативні та заздалегідь оброблені зразки при t 2–8 °С — протягом 1 доби; при t (- 20) °С — протягом  1 тиж.; при t (-70)°С — довготривало. Допускається лише одноразове заморожування матеріалу.

•  Біопсійний та аутопсійний матеріал:
Матеріал забирають із зони ймовірного місцезнаходження збудника інфекції, з пошкодженої тканини або з прикордонної з пошкодженим місцем ділянки.
Шматочки тканини діаметром не більше 5 мм розміщають в одноразову стерильну пробірку об'ємом 2 мл з транспортним середовищем, яку щільно закривають. Макроаутоптат розміщають в контейнері з фізіологічним розчином або спеціальним транспортним середовищем.
         Умови зберігання та перевезення: нативні та заздалегідь оброблені зразки при t 2–8 °С — протягом 1 доби; при t (- 20) °С — протягом  1 тиж.; при t (-70)°С — довготривало. Допускається лише одноразове заморожування матеріалу.
         Взірці потребують попередньої обробки.
Мікробіоптати (пунктати) або мікроаутоптати печінки, селезінки, передміхурової залози, шлунково-кишкового тракту, шийки матки тощо, які знаходяться в мікропробірках  з кришками об'ємом 1,5 мл, що містять 0,1 мл транспортного середовища , предобробки не вимагають. Далі виділення нуклеїнових кислот проводять згідно з інструкцією до набору реагентів.
Макробіоптати або макроаутоптати.
При виявленні вірусних агентів шматочки тканини масою 0,1-1 г поміщають в охолоджену порцелянову ступку і додають охолоджений ізотонічної розчин хлориду натрію об'ємом 0,5-1 мл. Подрібнюють стерильними ножицями з наступним розтиранням товкачем. Через ватний тампон відбирають надосадову рідину (0,1-0,2 мл) стерильним наконечником з фільтром у стерильні мікропробірки.
При виявленні бактеріальних агентів процес підготовки макробіоптатов (макроаутоптатов) аналогічний, тільки ступку і ізотонічний розчин не охолоджують.
В інший спосіб біоптат безпосередньо перед виділенням нуклеїнових кислот поміщають в рідкий азот , потім акуратно подрібнюють його товкачем в попередньо охолодженій рідким азотом порцеляновій ступці . Зважують 100 мг шматочків тканини і розтирають їх в ступці в рідкому азоті до порошку. Потім для виділення РНК порошок переносять в гомогенізатор та виділяють РНК згідно інструкції. Для виділення ДНК до отриманого порошку додають рівний об'єм стерильного фізіологічного розчину ( 0,1 мл) , ретельно перемішують і відбирають необхідну кількість матеріалу згідно інструкції виділення ДНК.
Порцеляновий посуд, а також гомогенізатори повинні бути попередньо оброблені хромпиком та простерилізовані. При гомогенізації декількох зразків необхідно після кожної проби протирати поверхню столу 0,2% розчином ДП-2Т, потім водою і 70% етиловим спиртом і міняти перед обробкою наступної проби рукавиці.

•  Виділення кон`юнктиви:
Матеріал забирають сухим стерильним ватним тампоном на пластиковій основі під місцевою анестезією ( 2 краплі розчину декаїна ) . Відтягнувши нижню повіку , обертальними рухами проводять зонд 4-5 разів по кон'юнктиві , захоплюючи зовнішній та внутрішній кути ока.
Після взяття матеріалу тампон ( робочу частину зонда з ватним тампоном ) поміщають в одноразову стерильну пробірку з кришкою об'ємом 2 мл , що містить відповідне транспортне середовище . Після його занурення акуратно обламують пластиковий стрижень на відстані не більше 0,5 см від робочої частини і залишають робочу частину зонда з матеріалом в транспортному середовищі . Пробірку щільно закривають кришкою.
         Умови зберігання та перевезення: нативні та заздалегідь оброблені зразки при t 2–8 °С — протягом 1 доби; при t (- 20) °С — протягом  1 тиж.; при t (-70)°С — довготривало. Допускається лише одноразове заморожування матеріалу.
         Взірці не потребують попередньої обробки.

•  Харкотиння:
Забір матеріалу здійснюють у кількості не менше 1,0 мл в одноразові мірні стерильні ємкості з широким отвором і кришками об'ємом не менше 50 мл.
         Умови зберігання та перевезення: нативні та заздалегідь оброблені зразки при t 2–8 °С — протягом 1 доби; при t (- 20) °С — протягом  1 тиж.; при t (-70)°С — довготривало. Допускається лише одноразове заморожування матеріалу.
         Взірці потребують попередньої обробки. Перед виділенням нуклеїнових кислот, необхідно провести розрідження харкотиння , використовуючи розчин «Муколізін» (Na2HPO4 77,4 мМ , NaH2PO4 22,6 мМ , бета- МЕ 99,4 мМ , 5 % азид натрію у кінцевій концентрації 0,05 %). У ємкість з харкотинням додають «Муколізін» у співвідношенні 5:1 (5 частин «Муколізіну» до 1 частини харкотиння) , орієнтуючись на мірні поділки ємкості , та стерильні скляні намиста . В процесі розрідження мокротиння (20-30 хвилин) ємкість періодично струшують. Потім автоматичною піпеткою , використовуючи наконечник з фільтром , відбирають 1 мл розрідженої мокроти , поміщають в пробірку, щозагвинчується  кришкою або в мікроцентрифужну пробірку з кришкою на 1,5 мл і центрифугують при 5000-7000 g ( 8000-10000 об. / хв) протягом 10 хвилин. Видаляють 0,8 мл надосадової рідини , осад клітин перемішують з 0,2 мл рідини, що  залишилася.
Допускається виділення ДНК / РНК з 0,1 мл розрідженої мокроти без стадії центрифугування.

•  Слина:
Перед отриманням слини проводять триразове полокання порожнини рота фізіологічним розчином. Слину забирають в кількості не менше 1,0 мл в одноразові стерильні пластикові пробірки об'ємом 2 мл. Пробірку щільно закривають кришкою.           Умови зберігання та перевезення: нативні та заздалегідь оброблені зразки при t 2–8 °С — протягом 1 доби; при t (- 20) °С — протягом  1 тиж.; при t (-70)°С — довготривало. Допускається лише одноразове заморожування матеріалу.
         Взірці не потребують попередньої обробки.

•  Матеріал ерозивно-виразкових елементів (везикул та пустул):
Перед забором матеріалу шкірні елементи очищують ватним тампоном, змоченим ефіром або спиртом, потім проколюють їх біля основи стерильною голкою. Для прискорення надходження матеріалу елемент зверху натискають пінцетом. Кірку або верхню частину везикул відокремлюють від шкіри голкою, скальпелем. Матеріал на дослідження вносять в пробірку з транспортним середовищем.
         Умови зберігання та перевезення: нативні та заздалегідь оброблені зразки при t 2–8 °С — протягом 1 доби; при t (- 20) °С — протягом  1 тиж.; при t (-70)°С — довготривало. Допускається лише одноразове заморожування матеріалу.
         Взірці не потребують попередньої обробки.

3. Важливо пам`ятати, є неприйнятним використання багаторазових ножиць для обрізання робочої частини зонда – це може призвести до перехресної контамінації клінічним матеріалом і, як наслідок, отримання помилково-позитивних результатів.

 

4. Пробірки з матеріалом щільно закривають кришкою, не торкаючись її внутрішньої поверхні, та не допускаючи зазору її внутрішньої частини,  маркірують, упаковують, оформляють належним чином направлення і доставляють в лабораторію.

Графік роботи
Пн. - Пт. 8 - 18 8 - 14*
Сб. 8 - 15 8 - 12*
Нд. Вихідний
* - забір крові з вени
Графік роботи лікарів
Теги